在不限制性消化的情况下产生无缝质粒DNA或BAC克隆

Gibson组装过程从设计末端重叠20-40bp的dsDNA片段开始。对于Gibson Assembly HiFi 1步反应，这些DNA片段与2X Gibson Assembly®HiFi 1步主混合物结合并孵化。在这段时间内，互补端被生成、退火和密封。这个一步恒温过程可以在不到60分钟的时间内完成，并产生一个转染或转化准备好的、双链、完全连接的DNA结构。

GA 1步主混合物（2X）包含一种酶和试剂的专有混合物，优化后可促进双标准DNA片段的一步组装。该mastermix包括一个校对多聚酶，它介导连接修复，以低连接错误率和高序列保真度得到组装结构。GA阳性对照（2X）足以进行2个反应（5和10个反应试剂盒）或5个反应（50个反应试剂盒）。该对照品由10ng 1.5kb插入物和30ng含有氨苄西林抗性基因的2.7kb载体组成。4.2 kb组装结构的选择可以使用含有100μg/ml氨苄西林、0.1 mM IPTG和40μg/ml X-Gal的LB琼脂板进行。[Gibson组装方法允许在几乎任何载体中插入一个或多

在不限制性消化的情况下产生无缝质粒DNA或BAC克隆

Gibson组装过程从设计末端重叠20-40bp的dsDNA片段开始。对于Gibson Assembly HiFi 1步反应，这些DNA片段与2X Gibson Assembly®HiFi 1步主混合物结合并孵化。在这段时间内，互补端被生成、退火和密封。这个一步恒温过程可以在不到60分钟的时间内完成，并产生一个转染或转化准备好的、双链、完全连接的DNA结构。

GA 1步主混合物（2X）包含一种酶和试剂的专有混合物，优化后可促进双标准DNA片段的一步组装。该mastermix包括一个校对多聚酶，它介导连接修复，以低连接错误率和高序列保真度得到组装结构。GA阳性对照（2X）足以进行2个反应（5和10个反应试剂盒）或5个反应（50个反应试剂盒）。该对照品由10ng 1.5kb插入物和30ng含有氨苄西林抗性基因的2.7kb载体组成。4.2 kb组装结构的选择可以使用含有100μg/ml氨苄西林、0.1 mM IPTG和40μg/ml X-Gal的LB琼脂板进行。[Gibson组装方法允许在几乎任何载体中插入一个或多个线性双链DNA片段，而无需依赖兼容的限制性位点。Gibson组装法明显快于传统的基于限制性内切酶消化的克隆法，并被证明可以同时克隆小片段和大片段的双链DNA。使用Gibson Assembly®HiFi一步法试剂盒，可以在一个试管中一步完成一到五个大小在500 bp到32kb之间的插入物的同时克隆，使用一个稳健的等温反应，克隆效率可超过90%。

订购信息：提供5、10或50个反应的套件。所有试剂盒均包含一瓶GA一步混合（2X）和一瓶GA阳性对照（2X）以及详细的使用手册。