COMET高度多重免疫荧光成像分析系统

COMET是一个高通量自动化免疫荧光染色平台，能够对单个组织切片中多达 40 个蛋白质靶标进行成像。

该平台允许与标准抗体库进行多重分析，无需缀合或条形码。

使用顺序 IF (seqIF TM ) 方法意味着可以在几天（而不是几个月）内开发出高度多重的面板，并且具有高度的组织保存和信号稳定性。

• 对单个组织切片中多种感兴趣蛋白质的位置和丰度进行成像
  
• 获取大量上下文信息
  
• 更深入地研究复杂的细胞相互作用
  
• 在免疫肿瘤学、神经科学和传染病领域有着广泛的应用

OMET? 使用序贯免疫荧光 (seqIF?) 方法执行 hyperplex 检测，无需用户干预，可在不到一天的时间内自动检测一个组织样本中多达 40 个蛋白质生物标志物。

为了研究不同的组织并分析其免疫群体，使用 40 重组对由 24 个肿瘤和非肿瘤组织核心组成的多器官组织微阵列 (TMA) 进行染色。

COMET? 系统上具有 40 个标记的染色方案显示出在 TMA 上跨多种组织类型的高度可转移性，并对所有 40 个标记进行了高质量染色。

这证明了 COMET? 上的 hyperplex 检测对于解决免疫肿瘤学领域相关问题的稳健性。该检测与 COMET? 的可移植性使得研究人员能够在单次染色运行中直接比较对照组织与目标组织、

健康样本与肿瘤样本或同一载玻片中的患者群体的免疫特征。遵循交互式数据集，探索高质量染色，并搜索有趣的发现。

凭借其 COMET 荧光集成染色和成像仪器，Lunaphore Technologies 使任何实验室都可以利用通过分析组织样本的空间构成所提供的深刻见解。Lunaphore 改变游戏规则的芯片技术能够使用现成的无标记抗体在一天内可视化单个样本中多达 40 个标记。

空间生物学根据基因组和蛋白质组数据研究细胞的空间位置和表型。研究生物标志物的空间分布正在帮助研究人员开发更的诊断测试，但直到近，高复杂性和技术障碍限制了基于多重的空间组织分析的采用。Lunaphore 席执行官兼创始人 Ata Tuna Ciftlik 表示：“这种情况现在正在发生变化，基础研究、转化研究和临床研究领域的兴趣大幅增长。” Ciftlik 于 2014 年与生物工程师同事 Diego Gabriel Dupouy（现任 Lunaphore 席技术官）和 Déborah Heintze（现任席营销官）共同创立了这家瑞士公司。

COMET平台是一款自动序列多重仪器，能够进行染色、显微镜成像和图像分析，无需人工干预即可产生高质量数据（图1）。该仪器采用 Lunaphore 专有的微流控芯片。“我们发明了一种技术，可以将自身附着在标准组织学载玻片上的组织切片周围，并在整个切片上形成一个薄的腔室。我们可以在不到一秒的时间内在整个部分上输送和清洗试剂，并且空间均匀性近乎完美。”Ciftlik 解释道。每个循环使用标准一抗和荧光标记二抗进行直接成像。然后洗脱抗体以进行进一步的循环。

COMET平台的优势

Lunaphore 系统的主要优点是使用方便。“市场上的所有其他技术都依赖于某种条形码，要么是需要与重金属结合的一抗，要么是需要使用非标准荧光光谱标记进行检测。这导致上游的严重复杂性和成本增加。”Ciftlik 说。“相比之下，COMET 不需要条形码，不需要定制切割样品，也不需要预先处理或操作试剂。”

该系统可以在每个循环中检测两种抗体，超过 20 个重复循环，允许对每张玻片多达 40 个立的空间标记进行多重分析。该系统与试剂或工作流程完无关，并且可以轻松调整和优化。“我们的客户可以使用他们库中的任何抗体，并且可以在几天内轻松添加和减去抗体，这对于任何条形码技术来说几乎是不可能的，”Ciftlik 补充道。

结果是一个单一仪器系统可以提供当天的结果。通过优化试剂与组织的相互作用，该芯片将孵育时间瓶颈从几小时缩短至几分钟。减少与刺激性试剂的接触也有助于保持组织样本的形态并提高信号稳定性。

COMET 验证

去年，COMET 在多个实验室进行了 beta 测试，其中包括位于瑞典斯德哥尔摩的 SciLifeLab。“使用 COMET 意味着我们不需要对我们的一抗进行缀合或做任何事情，对我们来说这很重要，因为我们有很多内部生成的抗体我们想要应用，”负责人 Charlotte Stadler 说空间蛋白质组学设施的主任兼 SciLifeLab 空间和单细胞生物学平台的联合主任。

斯塔德勒使用该仪器构建了针对结直肠癌的多重检测。“我们喜欢 COMET 的一点是，我们可以将所有这些放在同一个载玻片上，然后在同一次运行中收集数据。我们还发现，经过 10 次洗脱循环后，形态保存得好。” Stadler 的实验室现在拥有自己的仪器，并计划在 2022 年开始向其他研究人员和行业项目提供其使用，作为 SciLifeLab 空间蛋白质组学设施服务1的一部分。

“加压微流体系统减少了孵化和总体方案时间。这意味着 hyperplex 免疫组织化学项目可以在创纪录的时间内完成，”伯明翰大学免疫学和免疫治疗研究所临床研究员 Matthew Pugh, FRCPath 说。

Lunaphore 简单的样本输入、数据输出方法将使空间生物学能够进入从基础和转化研究到临床开发的任何环境。“传统上，空间生物学的客户是专家，但我们的方法允许新类型的用户将空间数据集成到他们的研究工作流程中，”Ciftlik 说。该公司的目标是像 Illumina 扩大测序的范围一样扩大空间生物学的范围，为下一代个性化疗法提供桥梁。